抗小鼠胰岛素抗体(IAA)试剂盒说明书

抗小鼠胰岛素抗体(IAA)试剂盒

(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用间接ELISA法。用Insulin抗原包被于酶标板上，标准品和样品中的IAA抗体与抗原结合，加入HRP标记的Protein A，形成**复合物连接在板上，加入底物工作液显蓝色，*后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，IAA浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IAA抗体的浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
2. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。血清、血浆作1：11稀释（取10ul，加1×标本稀释液100ul震荡混匀,稀释11倍）。
3. 标准品液配制：设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，**至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入200ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至**管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。
4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃30分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应10分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 以标准品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应IAA含量，再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能

            1. 灵敏度：*小的IAA检测浓度小于0.2ng/ml。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的小鼠IAA。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

注意事项

            1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致**度误差及OD值错误地升高。

            3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

            4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！