大鼠睾酮(Testosterone)ELISA试剂盒使用说明书

大鼠睾酮(Testosterone)ELISA试剂盒

(用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

本实验采用酶联竞争法及生物素-亲和素放大实验原理。样品中的Testosterone、生物素标记Testosterone与固相板上的抗体Testosterone发生竞争结合。反应平衡后，再加入HRP酶标记的亲和素，形成 固相抗体-生物素化Testosterone-亲和素-HRP复合物。加入底物工作液显色，*后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，随着样品中Testosterone浓度的升高，OD值成逐渐下降的线性关系，可通过OD值比对标本中Testosterone抗体的浓度。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）。
2. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
3. 标准品液配制：取6个1.5ml离心管，**管加1×洗涤液900ul，**至第六管加入1×洗涤液400ul。在**管中加入200ng/ml的标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至**管。如此反复作3倍比稀释，从第五管中吸出200ul弃去。第六管为零孔。

检测程序

1. 加样：每孔加入**抗体工作液50ul，反应10分钟。然后每孔依次各加入标准品，待测样品50ul，每孔加入生物素-Testosterone各50ul（空白孔除外）。盖紧封板膜以避免交叉污染。将反应板置振荡器（400-500rpm）室温（18-25℃）120分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
3. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃10分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1，也可以直接计算。
2. 以标准品20、6.67、2.22、0.74、0.24、0.08、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。
3. 根据样品OD值计算出相应Testosterone含量即可。软件可以向本公司邮件索取。

试剂盒性能

            1. 灵敏度：*小的Testosterone 检测浓度小于0.04ng/ml。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠Testosterone。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10％。

注意事项

            1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致**度误差及OD值错误地升高。

            3. 检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

            4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

            5. 说明书中试剂盒组成为96T的量，48T的量应减半！

6. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。仅用于科研，不能用于临床诊断！